色譜分析法（Chromatography）簡(jiǎn)稱色譜法或?qū)游龇ǎ?/span>

是一種物理或物理化學(xué)分離分析方法，該法利用某一特定的色譜系統(tǒng)

（薄層色譜、高效液相色譜或氣相色譜等系統(tǒng)）進(jìn)行混合物中各組分

的分離分析，主要用于分析多組分樣品。

? 固定相：在色譜分離中固定不動(dòng)，對(duì)樣品產(chǎn)生保留的一相。

? 流動(dòng)相：帶動(dòng)樣品向前移動(dòng)的另一相。

按兩相物理狀態(tài)分類

? 流動(dòng)相：氣相色譜、液相色譜、超臨界流體色譜

? 固定相：氣－固、氣－液；液－固、液－液

按固定相的形式分類

? 柱色譜：填充柱色譜、毛細(xì)管柱色譜、微填充柱色譜、制備色譜

? 平面色譜：紙色譜、薄層色譜、高分子膜色譜

按分離機(jī)制分類

? 吸附色譜：根據(jù)不同組分在吸附劑上的吸附和解吸能力的大小而分離

? 分配色譜：根據(jù)不同組分在固定液中溶解度的大小而分離

? 分子排阻色譜：依據(jù)分子體積大小不同進(jìn)行分離ln離子交換色譜：不同組分對(duì)離子交換樹脂的親和力不同而分離

? 親和色譜：利用生物大分子之間的存在的專一的特殊親和力進(jìn)行分離

? 毛細(xì)管電泳：依據(jù)各組分淌度和（或）分配行為的差異進(jìn)行分離

? 手性色譜：用于手性藥物的分離分析，可分為三類：手性衍生化試劑法；手性流動(dòng)相添加劑法；手性固定相拆分法

檢測(cè)色譜分離后組分的響應(yīng)信號(hào)對(duì)時(shí)間作圖得到的曲線稱為色譜圖。

? 基線：在一定色譜條件下，僅有流動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)器系統(tǒng)時(shí)所產(chǎn)生的信號(hào)的曲線，

稱為基線，如圖中ot線。實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定時(shí)，基線是一條平行于橫軸的線；

基線反映儀器（主要是檢測(cè)器）的噪聲隨時(shí)間的變化。

? 峰高：色譜峰頂點(diǎn)與基線之間的垂直距離，以h表示，如圖AB’線。

? 區(qū)域?qū)挾龋荷V峰的區(qū)域?qū)挾戎苯优c分離效率有關(guān)。

描述色譜峰寬的方法有三種：標(biāo)準(zhǔn)偏差σ、峰寬W、半峰寬W1/2。 

? 標(biāo)準(zhǔn)偏差（σ）：σ為正態(tài)分布曲線上兩拐點(diǎn)間距離之半，

σ值的大小表示組分離開色譜柱的分散程度。 σ值越大，流出的組分越分散，

分離效果變差；反之，流出組分集中，分離效果好。

? 峰寬W：通過(guò)色譜峰兩側(cè)的拐點(diǎn)作切線，在基線上的截距稱為峰寬，

或稱基線寬度，也可用W表示，如圖IJ的距離。根據(jù)正態(tài)分布的原理 ，

可證得峰寬和標(biāo)準(zhǔn)差的關(guān)系是W=4σ。

? 半峰寬W1/2：峰高一半處的峰寬稱為半峰寬，如圖 GH 的距離。

 W1/2=2.355σ，W=1.699W1/2。

W1/2、W都是由σ派生而來(lái)的，除用它們衡量柱效外，還用于計(jì)算峰面積。

半峰寬測(cè)量較方便，最為常用。

? 保留值

是用來(lái)描述樣品組分在色譜柱中保留程度的參數(shù)，并作為色譜定性的指標(biāo)。其表示方法有：

? 相對(duì)保留值

又稱分離因子、分配系數(shù)比或相對(duì)容量因子，即在一定色譜條件下，

被測(cè)組分的調(diào)整保留時(shí)間（體積）與標(biāo)準(zhǔn)物的調(diào)整保留時(shí)間（體積）之比。

采用相對(duì)保留值是為了消除某些操作條件，如流速和固定液流失等，對(duì)保留值的影響。

相對(duì)保留值中標(biāo)準(zhǔn)物可以是被測(cè)樣品中的某一組分，也可以是人為加入的某一化合物。

? 保留指數(shù)

I為待測(cè)物質(zhì)i在某固定液X上的保留指數(shù)，選取兩個(gè)正構(gòu)烷烴作為基準(zhǔn)物質(zhì)，

其中一個(gè)的碳數(shù)為N，另一個(gè)為N+n，它們的調(diào)整保留時(shí)間分別為t’R(N)和 t’R(N+n)，

使待測(cè)物質(zhì)i的調(diào)整保留時(shí)間t’R(i)恰好于兩者之間，即t’R(N)<t’R(i)<t’R(N+n)。

將含物質(zhì)i和所選的兩個(gè)正構(gòu)烷烴的混合物注入其固定液X的色譜柱，在一定溫度條件下繪制色譜圖。

? 保留值與容量因子及分配系數(shù)的關(guān)系

色譜分離是基于固定相對(duì)試樣中各組分的吸附或溶解能力強(qiáng)弱的不同，

而這種吸附或溶解能力的強(qiáng)弱可定量地用分配系數(shù)K（或容量因子k）值的大小來(lái)表示。

吸附或溶解能力強(qiáng)的組分分配系數(shù)（或容量因子）大，保留時(shí)間長(zhǎng)；

反之，吸附或溶解能力弱的組分分配系數(shù)小，保留時(shí)間短。

主要包括塔板理論和速率理論。

【塔板理論】

1. 提出——熱力學(xué)理論

? 始于馬?。∕artin）和辛格（Synge）提出的塔板模型。

? 分餾塔：在塔板上多次氣液平衡，按沸點(diǎn)不同而分離。

? 色譜柱：組分在兩相間的多次分配平衡，按分配系數(shù)不同而分離。

2. 假設(shè)

（1）色譜柱內(nèi)存在許多塔板，組分在塔板間隔（即塔板高度）內(nèi)可以很快達(dá)到分配平衡。

（2）流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱，不是連續(xù)的而是脈動(dòng)式的，即每次通過(guò)為一個(gè)塔板體積。

（3）樣品加在每個(gè)塔板上，樣品沿色譜柱軸方向的擴(kuò)散可以忽略。

（4）在所有塔板上分配系數(shù)相等，與組分的量無(wú)關(guān)。即分配系數(shù)在各塔坂上是常數(shù)。

（一）定性分析

色譜定性分析就是要確定各色譜峰所代表的化合物。由于各種物質(zhì)在一定的色譜條件下均

有確定的保留值，因此保留值可作為一種定性指標(biāo)。目前各種色譜定性方法都是基于保留值的。

但是不同物質(zhì)在同一色譜條件下，可能具有相似或相同的保留值，即保留值并非專屬的。

因此僅根據(jù)保留值對(duì)一個(gè)完全未知的樣品定性是困難的。如果在了解樣品的來(lái)源、性質(zhì)、

分析目的的基礎(chǔ)上，對(duì)樣品組成作初步的判斷，再結(jié)合下列的方法則可確定色譜峰所代表的化合物。

1. 利用純物質(zhì)對(duì)照定性

在一定的色譜條件下，一個(gè)未知物只有一個(gè)確定的保留時(shí)間。因此將已知純物質(zhì)在相同的色譜

條件下的保留時(shí)間與未知物的保留時(shí)間進(jìn)行比較，就可以定性鑒定未知物。若二者相同，

則未知物可能是已知的純物質(zhì)；不同，則未知物就不是該純物質(zhì)。

純物質(zhì)對(duì)照法定性只適用于組分性質(zhì)已有所了解，組成比較簡(jiǎn)單，且有純物質(zhì)的未知物。

2. 相對(duì)保留值法

在某一固定相及柱溫下，分別測(cè)出組分i和基準(zhǔn)物質(zhì)s的調(diào)整保留值，再按上式計(jì)算即可。

用已求出的相對(duì)保留值與文獻(xiàn)相應(yīng)值比較即可定性。

3. 加入已知物增加峰高法

當(dāng)未知樣品中組分較多，所得色譜峰過(guò)密，用上述方法不易辨認(rèn)時(shí)，

或僅作未知樣品指定項(xiàng)目分析時(shí)均可用此法。

首先作出未知樣品的色譜圖，然后在未知樣品加入某已知物，又得到一個(gè)色譜圖。

峰高增加的組分即可能為這種已知物。

4. 保留指數(shù)定性法

保留指數(shù)表示物質(zhì)在固定液上的保留行為，是目前GC中使用最廣泛并被國(guó)際上公認(rèn)的定性指標(biāo)。

它具有重現(xiàn)性好、標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一及溫度系數(shù)小等優(yōu)點(diǎn)。

保留指數(shù)僅與固定相的性質(zhì)、柱溫有關(guān)，與其它實(shí)驗(yàn)條件無(wú)關(guān)。

其準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性都很好。只要柱溫與固定相相同，就可應(yīng)用文獻(xiàn)值進(jìn)行鑒定，而不必用純物質(zhì)相對(duì)照。